解析PCR实验的原理、分类及品牌市场

PCR概念

　　聚合酶链反应(基因扩增)：基本原理 类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR是模拟体内DNA复制过程，在体外特异性扩增DNA片段的一种技术。

　　PCR的应用领域

　　1、遗传病和某些疑难病的诊断

　　2、病原体的检测。某些恶性疾病一般用微生物学、生化和免疫 学技术无法查出病原体时，可用PCR来检查。

　　3、法医和刑侦鉴定。

　　4、癌基因的检查。

　　5、基因探针的制备。

　　6、基因组测序、染色体巡视。

　　7、cDNA库的构建。

　　8、基因突变的分析和定位诱变。

　　9、DNA重组。

　　10、基因的分享和克隆。

　　标准的PCR过程分为三步

　　DNA变性

　　(90℃-96℃)：双链DNA模板在热作用下，氢键断裂，形成单链DNA

　　退火

　　(60℃-65℃)：系统温度降低，引物与DNA模板结合，形成局部双链。

　　延伸

　　(70℃-75℃)：在Taq酶(在72℃左右，活性最佳)的作用下，以dNTP为原料，从引物的3′端开始以从5′??′端的方向延伸，合成与模板互补的DNA链。

　　PCR仪的分类

　　根据DNA扩增的目的和检测的标准可以将PCR仪分为普通PCR仪，梯度PCR仪，原位PCR，实时荧光定量PCR仪等几类。

　　普通PCR仪

　　一般把一次PCR扩增只能运行一个特定退火温度的PCR仪，称之为普通PCR仪。如果要用它做不同的退火温度则需要多次运行。主要是用作简单的，对目的基因退火温度的扩增。

　　梯度PCR仪

　　一次性PCR扩增可以设置一系列不同的退火温度条件(通常12种温度梯度)的称之为梯度PCR仪。因为被扩增的不同的DNA片段其最适合的退火温度不同，通过设置一系列的梯度退火温度进行扩增，从而一次性PCR扩增就可以筛选出表达量高的最适合退火温度进行有效的扩增。主要用于研究未知DNA退火温度的扩增，这样既节约时间，也节约经费。在不设置梯度的情况下亦可当做普通的PCR用。

　　原位PCR仪

　　是用于从细胞内靶DNA的定位分析的细胞内基因扩增仪。如病原基因在细胞的位置或目的基因在细胞内的作用位置等。可保持细胞或组织的完整性，使PCR反应体系渗透到组织和细胞中，在细胞的靶DNA所在的位置进行基因扩增。不但可以检测到靶DNA，还能标出靶序列在细胞内的位置。于分子和细胞水平上研究疾病的发病机理和临床过程及病理的转变有着重大的实用价值。

　　实时荧光定量PCR仪

　　在普通PCR仪基础上增加一个荧光信号采集系统和计算机分析处理系统，就成了荧光定量PCR。其PCR扩增原理和普通PCR扩增原理相同，只是在PCR扩增时加入的引物是利用同位素、荧光素等进行标记，使用引物和荧光探针同时与模板特异性结合扩增。扩增的结果通过荧光信号采集系统实时采集信号连接输送到计算机分析处理系统，得出量化的实时结果输出。

　　荧光定量PCR仪有单通道，双通道和多通道之分。当只用一种荧光探针标记的时候，选用单通道;有多种荧光标记的时候使用多通道。单通道也可以检测多荧光的标记和目的基因表达产物，因为一次只能检测一种目的基因的扩增量，需多次扩增才能检测完不同的目的基因片段的量。

　　PCR的各个品牌

　　国产品牌

　　上海领成、西安天隆、杭州郎基、珠海黑马、杭州博日、上海宏石、厦门安普利、杭州晶格、北京亚力恩、北京东胜、上海枫岭。

　　目前国内市场主要被：上海领成，西安天隆，杭州郞基，珠海黑马，杭州博日五大品牌所占有。

　　普通PCR仪价格在18000-20000元左右，梯度PCR仪价格在26000-28000元左右，实时荧光定量PCR仪价格在130000-150000元左右。

　　进口品牌

　　美国ABI、美国Labnet莱伯特、美国Bio-rad伯乐、英国Genetech、英国Techne、德国Eppendorf艾本德、新加坡Esco艺思高、日本TaKaRa、日本ASTEC、澳大利亚Corbett柯柏特、德国Jena耶拿、德国biometra、德国BOECO、英国CLEAVER科丽沃、瑞士ROCHE罗氏、英国Quanta、德国PEQLAB、荷兰Creacon、美国Cepheid、美国Thermo热电。

　　目前进口品牌中美国ABI，美国labnet，美国Bio-rad，日本TaKaRa，英国Techne，德国Eppendorf六大品牌占有率比较高。

　　根据近年来销量分析，其中美国ABI除了9700型普通PCR基因扩增仪和2720型基因扩增仪外，新推出的高精确性的Veriti梯度PCR仪，也是所有进口品牌梯度PCR仪中最受客户认可的一款，是近两年来销量较高一款PCR仪;

　　其次是美国Bio-rad;

　　日本TaKaRa和美国Labnet梯度PCR仪，价格相对进口品牌中比较便宜，质量和性能也比较稳定，从而深广大客户的认可，他们的销售成交价在45000-50000左右，而其它同性能价格的仪器价格在，60000-80000元，所以近年来市场的占有率呈上升的趋势;

　　德国Eppendorf和美国Bio-rad是以直销的模式销售，因其垄断直销方式，外面的经销商或者当地的经销商无法进去竞争，所以相同性能的产品价格相对其他品牌要高很多，成交价格一般在7-9万元左右，市场占有率相对有所下降;

　　英国Techne在国内生产，价格相对进口品牌中要低很多，销量有所上升，市场占有率也上升，价格在35000-40000元左右。